活检后样本处理不当，会让 PGT 检测结果 “失准” 吗？

胚胎活检完成后，获取的少量细胞样本（通常仅 3-10 个细胞）需经过保存、转运、全基因组扩增（WGA）等多环节处理，才能进入后续 PGT 检测流程。很多人关注活检操作本身的影响，却容易忽视这些 “后续环节”—— 若样本处理不当，是否会导致 PGT 检测结果偏离胚胎真实遗传状态？答案是肯定的。从样本离体后的保存条件，到转运过程中的环境控制，再到实验室扩增技术的稳定性，每一步都可能成为影响检测准确性的 “隐形变量”，需要逐一拆解其潜在风险与应对方案。

首先看样本保存环节的影响。活检获取的细胞样本离体后，若不能及时进入检测流程，需在专用保存液中暂存，保存液的成分、温度及保存时间，直接决定细胞活性与 DNA 稳定性。目前临床常用的保存液分为 “常温保存液”（20-25℃）和 “低温保存液”（4-8℃），前者适合短时间保存（≤2 小时），后者可延长至 4-6 小时。若保存液成分失衡，如 EDTA（防止 DNA 降解的成分）浓度过低（低于 0.5 mmol/L），会导致细胞内核酸酶激活，约 15%-20% 的样本会出现 DNA 片段化，片段化的 DNA 在后续扩增中易产生 “非特异性扩增产物”，使 PGT-A 检测出现假阳性（如误判染色体微缺失），发生率约 6%-8%。

温度波动是保存环节的另一大风险。常温保存时，若环境温度超过 28℃，细胞代谢速率加快，ATP 消耗增加，可能导致 DNA 复制酶活性下降，进而影响后续 WGA 效率；低温保存时，若温度低于 2℃，会引发细胞内水分结冰，形成的冰晶会刺破细胞膜，约 10%-12% 的样本会因此出现细胞破裂，DNA 释放到保存液中，导致样本 DNA 浓度降低，若浓度低于 10 pg/μL，会使 WGA 失败率提升 25%-30%，直接导致 PGT 检测无法进行。此外，保存时间过长也会增加风险 —— 常温保存超过 4 小时，样本 DNA 降解率可达 30% 以上，即使后续完成扩增，检测结果的信噪比也会显著下降，可能掩盖真实的染色体异常信号，造成假阴性。

再看样本转运环节的潜在问题。若活检与检测不在同一实验室进行，样本需通过专用转运箱转运，转运过程中的震动、温度变化及污染风险，均可能影响样本质量。震动强度超过 50 Hz 时，会导致保存液剧烈晃动，可能使细胞与保存液中的杂质（如容器壁脱落物）充分接触，约 8%-10% 的样本会因此出现杂质污染，若杂质中含有外源 DNA（如细菌、真菌或其他胚胎细胞），会在后续扩增中被同步放大，导致检测结果出现 “杂合信号”，例如在 PGT-M 检测中，可能误判胚胎同时携带正常基因与致病基因，造成检测结果模糊。

温度控制是转运环节的核心难点。即使使用恒温转运箱，若箱内温度波动超过 ±2℃（如夏季高温或冬季低温环境下），会导致样本细胞出现 “应激反应”，研究显示，温度波动超过 3℃时，细胞内应激基因（如 HSP70）表达会升高 2 倍以上，可能引发 DNA 甲基化模式改变，这种表观遗传变化虽不影响染色体数目检测，但会对单基因疾病的精准检测（如需要区分甲基化位点的检测项目）产生干扰，假阳性率可能升高 4%-5%。此外，转运时间过长（超过 6 小时）会增加样本暴露于外界环境的风险，若转运箱密封性不佳，可能导致灰尘、微生物进入，进一步增加污染概率。

全基因组扩增（WGA）作为活检样本处理的关键步骤，其技术稳定性直接决定 PGT 检测结果的准确性。WGA 的核心目的是将少量细胞的 DNA 扩增至满足检测需求的量（通常需 1-2 μg），但扩增过程中可能出现 “扩增偏倚”—— 即不同区域的 DNA 扩增效率不同，若某一染色体片段扩增效率过低（低于正常水平的 50%），会导致该片段在检测中被误判为 “缺失”，造成 PGT-A 检测假阳性；若扩增效率过高（超过正常水平的 2 倍），则可能被误判为 “重复”，假阳性率约 5%-7%。此外，WGA 过程中若出现 “等位基因脱扣”（ADO），即某一等位基因未被扩增，会导致 PGT-M 检测出现假阴性，例如胚胎实际携带致病基因，但因该基因未被扩增，检测结果显示为正常，ADO 发生率约 3%-6%，且与样本细胞数量呈负相关（细胞数量越少，ADO 风险越高）。

WGA 环节的污染风险也不容忽视。实验室环境中的外源 DNA（如操作人员的皮肤细胞、既往检测样本的残留 DNA）若进入扩增体系，会被同步放大，约 10%-12% 的污染样本会出现 “混合基因型”，导致检测结果无法准确判断胚胎的真实遗传状态。例如，外源 DNA 携带某一染色体异常，会使原本正常的胚胎样本被误判为异常，造成假阳性。此外，扩增试剂的质量也会影响结果 —— 若试剂中存在 DNA 酶污染，会导致样本 DNA 在扩增前被降解，约 5%-8% 的样本会因此出现扩增失败，需重新获取样本，而重复活检会进一步增加胚胎损伤风险。

针对这些环节的风险，临床已建立多维度质控体系。在样本保存方面，采用 “成分精准配比” 的专用保存液（EDTA 浓度控制在 1-2 mmol/L），并通过实时温度监控仪确保保存温度波动不超过 ±1℃，同时规定常温保存不超过 2 小时、低温保存不超过 6 小时；在转运环节，使用防震（震动强度≤30 Hz）、恒温（4-25℃可调）的专用转运箱，配备双重密封装置，转运时间严格控制在 8 小时内，且每批次转运样本均需附带 “温度 - 震动记录报告”，不合格样本直接剔除；在 WGA 环节，采用 “多重质控” 方案 —— 扩增前检测样本 DNA 浓度与纯度，扩增后通过琼脂糖凝胶电泳验证扩增产物质量，同时设置空白对照（仅含试剂不含样本）与阳性对照（已知基因型的标准 DNA），若对照出现异常，立即重新进行扩增，可使 WGA 失败率降低至 5% 以下，扩增偏倚发生率控制在 3% 以内。

活检后的样本处理环节虽不直接涉及胚胎操作，却是连接活检与 PGT 检测的关键桥梁，任何一步处理不当，都可能导致检测结果 “失准”。但通过标准化的保存条件、严格的转运控制及精准的 WGA 质控，可将这些风险降至最低。未来，随着微流控芯片技术的发展（如将样本保存、转运、扩增集成于芯片内，减少外界干扰），样本处理的稳定性将进一步提升，为 PGT 检测结果的准确性提供更坚实的保障。在当前技术阶段，选择具备完善样本处理质控体系的实验室，是确保 PGT 检测结果可靠的重要前提，而非单纯依赖活检技术本身的先进性。

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